Bakteerikulttuurin (lyofilisointi)

Jäädytyskuivaus, jota kutsutaan myös lyofilisoimiseksi tai kryoskooppiseksi, on menetelmä veden poistamiseksi tuotteesta sen jälkeen, kun se on pakastettu (ja asetetaan sitten alipaineeseen), jolloin jäätä voidaan muuttaa kiinteästä aineesta höyryksi, ilman nestefaasin läpi. Jäätä (tai muita jäädytettyjä liuottimia) poistetaan tuotteesta sublimaatiomenetelmällä ja sitoutuneet vesimolekyylit poistetaan desorptioprosessin kautta.

Lyofilisoinnin perusteet

Yksi parhaista tavoista säilyttää bakteeri-, sieni-, hiiva- tai muu mikro-organismiviljelmä pitkiä aikoja on käyttää pakastekuivausmenetelmää. Tämä lyhyt laboratoriomenettely voidaan toteuttaa minkä tahansa kaupallisesti saatavissa olevan pakastekuivattimen avulla, joka säilyttää kulttuuriasiakirjasi. Koska lyofilisointi on kaikkein monimutkaisin ja kalliin kuivausmuoto, prosessi on yleensä rajoitettu herkille, lämpöherkille materiaaleille, joilla on suuri arvo. Aineet, jotka eivät ole jäätyneet, voivat yleensä lyofilisoida siten, että jäähdytetty säilytys on tarpeetonta.

Tämä prosessi voi kestää jopa kolme tuntia ja jopa 24 tuntia, ei kuitenkaan kulttuurin kasvuaikaa.

Lyofilisoinnin vaiheittainen prosessi

1. Ensinnäkin kasvatetaan mikro-organismin yön yli viljely tai nurmikko LB: llä tai muulla sopivalla ravintoagagalevyllä.

2. Seuraavaksi valmistetaan steriilejä korkkiruuvi-injektiopulloja autoklavoimalla etukäteen, kun korkit (kumitulpat) asetetaan löyhästi päälle. Aseta paperin etiketit, jotka on painettu viljelmän tunnisteella putkien sisällä ennen autoklavointia. Vaihtoehtoisesti käytä putkia, joissa on korkit, jotka on suunniteltu steriloitavaksi.

3. Lisää 4 ml lyofilisointipuskuria levyyn. Tarvittaessa solut voidaan ripotella steriilillä lasisuihkulla.

4. Siirretään viljelysuspensio nopeasti steriloituun injektiopulloon. Lisää noin 1,5 ml / injektiopullo. Tiiviste kumisuojuksella.

5. Jäädytä viljelysuspensio ampullien sisälle asettamalla injektiopullot -20 celsiusasteiseen pakastimeen.

6. Kun viljelmät on pakastettu, valmistetaan pakastekuivain kääntämällä sitä ja antamalla aikaa sopiville lämpötila- ja tyhjiöolosuhteille vakauttamiseksi. Tee tämä valmistajan antamien ohjeiden mukaisesti, kun käytät pakastekuivaajan tuotemerkkiä.

7. Varovasti ja aseptisesti aseta injektiopullon korkit löyhästi injektiopullojen päälle niin, että kosteus voi paeta pakastekuivatuksen aikana ja aseta injektiopullot pakastekuivainkammioon. Levitä vakuumi kammioon valmistajan ohjeiden mukaan.

8. Anna viljelyajan lyofilisoida kokonaan (kuivua). Tämä voi kestää muutamasta tunnista yön yli riippuen kunkin näytteen tilavuudesta ja kuinka monta näytettä sinulla on.

9. Poista näytteet pakastekuivikammiosta valmistajan ohjeiden mukaan ja sulje injektiopullot välittömästi kumisuojuksilla, sitten puristinpäät.

10. Säilytä lyofilisoitu viljelmäkokoelma huoneenlämmössä.

Tuotteet, joita tarvitset

• Pakastekuivain
• Ravinteet tai muut sopivat agarlevyt (ja inkubaattori viljelykasvien viljelyyn)
• Lasitangot
• Lyofilisointipuskuri
• Crimp-injektiopullot kumitulpilla (ja kruunu korkkien kiinnittämiseen)
• Pakastin

_{Viite:
SP Scientific. Freeze kuivauksen perusperiaatteet. // www. spscientific. com / pakastekuivaus-lyofilisointi-basics /}