Miten valmistetaan fosfaattipuskuroitu suolaliuos (PBS)

PBS (fosfaattipuskuroitu suolaliuos) on yleisesti käytetty immunohistokemiallisen värjäyksen puskuri ja sitä käytetään yleisesti biologisessa tutkimuksessa. Liuosten osmolaarisuus ja ionipitoisuudet vastaavat ihmiskehon (isotonisia) pitoisuuksia.

PBS on vesipohjainen suolaliuos, joka sisältää natriumvetyfosfaattia, natriumkloridia ja joissakin tapauksissa kaliumkloridia ja kaliumdivetyfosfaattia.

Immunfluoresenssivärjäys IHC: lle

Immunfluoresenssivaaleus oli ensimmäinen immunohistokemiallinen (IHC) värjäysmenetelmä. Antigeenin ja vasta-aineen sitoutumisreaktion perustaksi antigeenit tulevat näkyviin käyttämällä fluoresenssivärejä konjugoituna vasta-aineiden kanssa. Prosessi tapahtuu, kun se aktivoituu jännittävän valon avulla tietyn aallonpituuden avulla fluoresoivalla mikroskoopilla. Immunohistokemia viittaa prosessiin, jossa tunnistetaan antigeenit (esim. Proteiinit) kudososan soluihin käyttämällä vasta-aineita, jotka sitoutuvat spesifisesti biologisiin kudoksiin antigeeneihin.

Fosfaattipuskuroitu suolaliuos (PBS)

Fosfaattipuskuroitu suolaliuos on monessa käytössä, koska se on isotoninen ja ei-toksinen useimmille soluille. Sitä voidaan käyttää laimentamaan aineita ja sitä käytetään säiliöiden huuhtelemiseen. PBS: ää voidaan käyttää laimennusaineena biomolekyylien kuivumenetelmissä, koska sen sisältämät vesimolekyylit rakennetaan aineen (esimerkiksi proteiinin) ympärille, jotta se voidaan kuivata ja immobilisoida kiinteälle alustalle.

Aineeseen sitoutuva ohut kalvo estää denaturoinnin tai muut konformaatiomuutokset. Karbonaattipuskuria voidaan käyttää samaan tarkoitukseen, mutta vähemmän tehokkuutta. PBS: ää voidaan käyttää myös referenssispektrin ottamiseen mittaamalla proteiinin adsorptio ellipsometrissä.

PBS: n valmistus

PBS: n valmistamisessa on monia erilaisia ​​tapoja.

Jotkut kaavat eivät sisällä kaliumia, kun taas toiset sisältävät kalsiumia tai magnesiumia. Alla oleva puskuri-resepti, joka on suhteellisen helppo, on 10 x PBS-varastoliuokselle (0,1 M). Lisäksi on mahdollisuus lisätä Tween. Koko prosessi kestää noin 10 minuuttia.

Fosfaattipuskuroitu suolaliuos (PBS)

1. Punnitaan seuraava: 10. 9 g vedetöntä natriumfosfaattia (Na2HP04), 3. 2 g vedetöntä natriumfosfaattia yksiemäksinen (NaH2P04) ja 90 g natriumkloridia (NaCl).
2. Kaikki edellä mainitut liuokset ovat alle 1 litran tislattua vettä.
3. Säädä pH arvoon 7. 4.
4. Tee liuos lopulliseen tilavuuteen 1L.
5. (vapaaehtoinen) Liuokseen, joka sisältää 0,5% Tween 20: a, lisätään 5 ml Tween 20 1L: n liuokseen.
6. Laimenna 10 x ennen käyttöä ja säädä tarvittaessa pH.

Vihjeitä PBS-puskurin valmistamiseksi

• Säilytä huoneenlämmössä.
• Vahvoja reagensseja voi olla korvaamaton, mutta sinun on laskettava uudelleen sopiva massa jokaisen lisättäessä vesimolekyylejä.

Sinun on tehtävä PBS-puskuria

• Yhdenmukainen natriumfosfaatti (vedetön)
• Diabeettinen natriumfosfaatti (vedetön)
• Natriumkloridi
• Skaalaus ja vaa'at
• Magneettisekoittimet ja sekoituspalkki > pH-anturi, kalibroitu ja sopivat liuokset pH: n säätämiseksi
• 1 litran mittapullo
• Tween 20 (valinnainen)