Miten TBE-puskuria voidaan tehdä 3 helppoa askelta

TBE-puskuriliuos on puskuriliuos, joka koostuu Tris-emäksestä, boorihaposta ja EDTA: sta (tai Tris-boraatti-EDTA: sta kokonaan). Tätä puskuria käytetään usein agaroosigeelielektroforeesissa DNA-tuotteiden analysoinnissa, jotka johtuvat PCR-monistuksesta, DNA: n puhdistusprotokollista tai DNA-kloonauskokeista.

TBE-puskuri on erityisen käyttökelpoinen pienempien DNA-fragmenttien (MW <1000), kuten pienien restriktioentsyymikatoaineiden, erottamiseksi.

TBE: llä on suurempi puskurointikapasiteetti ja antaa terävämmän erottelukyvyn kuin TAE-puskuri. TAE-puskuri on liuos, joka koostuu Tris-emäksestä, etikkahaposta ja EDTA: sta (Tris-asetaatti-EDTA).

TBE on yleensä kalliimpi kuin TAE ja estää DNA-ligaasia, mikä saattaa aiheuttaa ongelmia, jos myöhempi DNA: n puhdistus- ja ligaatiovaihe on tarkoitettu. Noudata seuraavia kolmea yksinkertaista vaihetta, oppia tekemään TBE-puskuri. Tämän puskurin luominen ei saisi kestää yli 30 minuuttia. Näin voit:

Valmistetaan EDTA: n varastoliuos

EDTA (etyleenidiamiinitetraetikkahappo) liuos valmistetaan etukäteen. EDTA ei mene täysin liuokseen, kunnes pH-arvoa säädetään noin 8. 0. 500 millilitran varastoliuokseen, joka sisältää 0,5 M EDTA, punnitaan 93,05 g EDTA: n dinatriumsuolaa (FW = 372,2). Sitten liuotetaan se 400 ml: aan deionisoitua vettä ja säädetään pH NaOH: lla. Tämän jälkeen lisätään liuos lopulliseen tilavuuteen 500 ml.

Valmistetaan TBE: n varastoliuos

Tee TBE: n väkevöity (5 x) kantaliuos punnitsemalla 54 g Tris-emästä (FW = 121,14) ja 27,5 g boorihappoa (FW = 61,83) ja liuottamalla sekä noin 900 millilitraan deionisoitua vettä. Lisää sitten 20 millilitraa 0,5 M EDTA: ta (pH 8,0) ja säädä liuos lopputilavuusan 1 litraan.

Tätä liuosta voidaan säilyttää huoneenlämmössä, mutta vanhassa liuoksessa muodostuu sakka. Säilytä puskuri lasipulloissa ja hävitä, jos muodostuu sakka.

TBE: n valmistusnesteen valmistus

Agaroosigeelielektroforeesille voidaan käyttää TBE-puskuria 0, 5x: n konsentraatiossa (konsentroidun kannan 1:10 laimennus). Laimennetaan kantaliuos 10 kertaa deionisoidussa vedessä. Lopulliset liukeneva pitoisuudet ovat 45 mM Tris-boraattia ja 1 mM EDTA. Puskuri on nyt käyttövalmis agaroosigeelin ajettaessa.

Mitä tarvitset

TBE-puskuriin tarvitaan vain neljä ainetta. Tämän luettelon jäljellä olevat kohteet ovat laitteita. Neljä vaadittavaa ainetta ovat EDTA-dinatriumsuola, Tris-emäs, boorihappo ja deionisoitu vesi.

Laitteiden osalta tarvitset tarvittaessa pH-mittarin ja kalibrointistandardit. Sen lisäksi tarvitset 600 millilitran ja 1500 millilitran pulloja tai pulloja. Laitteistovaatimusten pyöristäminen on mitoitettuja sylintereitä ja sekoita tankoja ja sekoita levyjä.

Tarkista varastosi laboratoriossasi, jonka avulla voit varmistaa, että sinulla on kaikki tarvittavat asiat ennen aloittamista. Mikään ei ole huonompi kuin lopettaa keskellä ratkaisun valmistelua, koska olet loppunut oikeista materiaaleista.

Jos laboratoriosi on koulussa tai työmaalla, tarkista asianmukainen henkilöstö nähdäksesi, että heillä on kaikki varastossa olevat tuotteet. Näin voit säästää aikaa ja energiaa lopussa.