Spesifisen aktiivisuuden merkitys proteiinin eristämisessä

Spesifinen aktiivisuus on termi, jota käytetään mittaamaan entsyymin reaktioaste substraatilla.

Spesifinen entsyymiaktiivisuus (spesifinen aktiivisuus lyhyenä) on entsyymipuhtauden mittana ja ilmoitetaan yksiköinä / mg . Arvo kasvaa, kun entsyymivalmiste tulee puhtaammaksi, koska proteiinimäärä (mg) on ​​tyypillisesti pienempi, mutta reaktionopeus pysyy samana (tai voi nousta johtuen pienentyneestä häiriöstä tai estäjien poistamisesta).

Spesifinen aktiivisuus: Entsyymi-kinetiikan mittaaminen

Taustapintaisena entsyymit ovat proteiineja, jotka toimivat katalyytteinä vähentäessä aktivointienergian määrää reaktiossa tapahtumaan. Aktivointienergia on energia, jota tarvitaan reaktioiden "käynnistämiseen", koska monet reaktiot eivät tapahdu kovin nopeasti (tai tapahtuvat lainkaan), jos ne ovat termodynaamisesti mahdollisia.

Entsyymit katalysoivat spesifisiä reaktioita tietyllä alueella (tunnettu aktiivinen alue), jossa reagenssit sitoutuvat ja reagoivat tuotteiden synnyttämiseksi. Alustilla on aktiivisia sivustoja, jotka ovat ominaisia ​​vain niille, jotta muut aineet eivät sitoudu tai reagoivat samaan kohtaan. Kuten lukko ja avain, kukin entsyymi katalysoi vain yhden spesifisen reaktion (muutamin poikkeuksin).

Spesifistä aktiivisuutta käytetään proteiinin eristämismenetelmissä, jotka osoittavat puhdistuksen prosenttiosuuden. On tärkeää tietää tämä yksikkö ostettaessa entsyymejä ilmaistaksesi tarkalleen, kuinka paljon puhdasta entsyymiä saat.

Entsyymi-kinetiikassa (entsyymin reaktioaste substraatilla tai pinnalla) määritetään spesifinen aktiivisuus entsyymin konvertoimiseksi (katalysoidut reaktiot) mg proteiinia entsyymivalmisteessa, ajan yksikköä kohden.

Esimerkki spesifisestä aktiivisuudesta olisi:

• Eristetyn entsyymin spesifinen aktiivisuus mitattiin 150 umol / min / mg proteiinilla ennen puhdistusta ja 800 umol / min / mg puhdistuksen jälkeen.

Erityinen aktiivisuus on tärkeä entsyymipuhdistuma. Erilaisilla puhtailla entsyymin erillä on oltava samat arvot ja jopa entsyymiliuoksen laimentaminen monta kertaa on identtisiä spesifisiä aktiivisuusarvoja, vaikka eri entsyymiaktiivisuusarvoja on olemassa. Tämä johtuu siitä, että spesifisen aktiivisuuden laskemisessa vaikuttaa numerolla (yksikköä / ml) ja nimittäjällä (mg / ml) yhtä lailla.

Erityinen aktiivisuus on hyvin erilainen kuin aktiviteetti, mutta spesifisen aktiivisuuden laskeminen riippuu kuitenkin aktiivisuusarvosta. Tämä tarkoittaa sitä, että ilmoitettu aktiivisuusarvo riippuu myös entsyymiyksikkömääritelmästä.

Entsyymien erät, joilla on odotettua alhaisempi spesifinen aktiivisuusarvo, voivat sisältää entsyymimolekyylejä, jotka ovat muuttuneet tai sekoitettu epäpuhtauksiin.

Entsyymiaktiivisuuteen vaikuttavat tekijät

On mahdollista, että yhdellä entsyymillä voi olla erilaisia ​​mitattuja aktiivisuusarvoja mitattuna eri laboratorioissa (toisin sanoen todelliset erot mitatussa aktiivisuudessa eivätkä erilaisten yksikkömääritelmien käytöstä aiheutuneet ilmeiset erot).

Määritysmenetelmä (testausmenetelmä entsyymien puhtauden määrittämiseksi) vaikuttaa raportoituihin aktiivisuusarvoihin. Esimerkiksi entsyymit ovat yleensä aktiivisempia lämpötilan ollessa 37 ° C verrattuna 20 ° C: een, joten jos määritys tehdään 21 ° C: ssa, arvot eroavat määrityksistä, jotka suoritettiin lämpötilassa 32 celsiusastetta (tyypillisesti , määritykset suoritetaan lämpötilassa välillä 20-37 ° C).

Tällöin entsyymiyksikön määritelmä paranee paremmin seuraavasti: 1 yksikkö (U) on entsyymin määrä, joka katalysoi 1 nmol: n substraattia minuutissa minuutissa standardiolosuhteissa.