Kuinka tehdä TAE-puskurin muutamassa askeleessa

TAE-puskuriliuos on liuos, joka koostuu Tris-emäksestä, etikkahaposta ja EDTA: sta (Tris-asetaatti-EDTA). Se on historiallisesti yleisin puskurin, jota käytetään agaroosigeelielektroforeesissa DNA-tuotteiden analyyseissä, jotka johtuvat PCR-monistuksesta, DNA: n puhdistusprotokollista tai DNA-kloonauskokeista.

Tällä puskurilla on alhainen ionivahvuus ja alhainen puskurointikyky. Se sopii parhaiten suurten (> 20 kb) DNA-palojen elektroforeesiin, ja se on vaihdettava usein tai kierrätettävä pidempään (> 4 h) geelin ajoaikaan.

Tässä mielessä kannattaa harkita useita puskurin eroja.

Koska puskuria on helppo tehdä ja vaiheet voidaan suorittaa nopeasti, useamman kuin yhden erän kerrallaan ei pitäisi olla erityisen aikaa vievää tai vaikeaa vetää pois. Alla olevien ohjeiden mukaan TAE-puskurin tekeminen kestää vain 30 minuuttia. Näin voit:

Valmistetaan EDTA: n varastoliuos

EDTA (etyleenidiamiinitetraetikkahappo) liuos valmistetaan etukäteen. EDTA ei mene kokonaan liuokseen, kunnes pH-arvoa säädetään noin 8. 0. 500 millilitran varastoliuokseen, joka sisältää 0,5 M EDTA, punnitaan 93,05 g EDTA-dinatriumsuolaa (FW = 372,2 ). Liuotetaan 400 ml: n deionisoituun veteen ja säädetään pH natriumhydroksidilla (NaOH). Liuota liuos lopulliseen tilavuuteen 500 ml.

TAI

Säilytä TAE: n väkevöityä (50 x) varastoliuosta punnitsemalla 242 grammaa Tris-emästä (FW = 121.14) ja liuottamalla se noin 750 millilitraa deionisoitua vettä.

Lisää varovasti 57. 1 millilitraa jäähauteaa ja 100 millilitraa 0,5 M EDTA: ta (pH 8,0). Sen jälkeen säädä liuos lopulliseen tilavuuteen 1 litraan. Tätä kantaliuosta voidaan säilyttää huoneenlämmössä. Tämän puskurin pH-arvoa ei ole säädetty, ja sen pitäisi olla noin 8. 5.

TAE : n valmistusnesteen valmistus> 1 x TAE-puskurin työliuos valmistetaan yksinkertaisesti laimentamalla kantakerros 50 x deionisoidulla vedellä.

Loppukonsentraattikonsentraatiot ovat 40 mM. Tris-asetaattia ja 1 mM EDTA: ta. Puskuri on nyt käyttövalmis agaroosigeelin ajettaessa.

Mitä tarvitset puskurille

Koska TAE-puskurin tekeminen edellyttää vain nopeaa ja yksinkertaista ohjeistusta, siihen tarvittavien materiaalien määrä ei ole liiallinen. Tarvitset vain EDTA-dinatriumsuolaa, Tris-emästä ja jääetikkaa.

Puskurin tekeminen edellyttää myös pH-mittaria ja kalibrointistandardeja. Tarvitset myös 600 millilitraa ja 1500 millilitraa pulloja tai pulloja sekä mitoitettuja sylintereitä. Lopuksi tarvitset deionisoitua vettä, sekoita tankoja ja sekoita levyjä.

Pakkaus

Mistä aiot tehdä puskuri - koulussa, työmaalla tai muulla sijainnilla, kuten kotonasi?Tarkista inventaari ennen kuin alat varmistaa, että sinulla on kaikki edellä mainitut materiaalit TAE-puskurille.

Jos et halua maksaa materiaaleja, suosittelemme tekemään puskuri kodin ulkopuolelta. Voit helposti tilata tarvitsemasi materiaalit verkossa tai käydä erikoiskaupassa.