RFLP: määritelmä ja sen käyttäminen DNA-mysteerien ratkaisemisessa

Rajoitusfragmentin pituus Polymorfismi (RFLP) on geneettisen analyysin molekyylimene- telmä, joka sallii yksilöiden tunnistamisen perustuen ainutlaatuisiin rajoitusentsyymileikkauksen malleihin DNA: n tietyillä alueilla.

Tätä kutsutaan myös RFLP-analyysiksi, tekniikka hyödyntää yksittäisten ihmisten geneettisten koodien polymorfismia. Vaikka kaikilla lajin jäsenillä on oleellisesti sama geneettinen meikki, nämä pienet erot aiheuttavat fenotyypin, kuten ulkonäön tai aineenvaihdunnan, vaihtelua yksilöiden välillä.

RFLP-analyysitekniikka edellyttää tietyn DNA-alueen leikkaamista tunnetulla vaihtelevuudella restriktioentsyymeillä, minkä jälkeen DNA-fragmentit erotetaan agaroosigeelielektroforeesilla ja määritetään DNA-fragmenttien määritys agaroosigeelielektroforeesilla. fragmentteja ja suhteellisia kokoja.

Restriktioentsyymi on entsyymi, proteiinimolekyyli, joka leikkaa DNA: ta restriktioalueilla. Pohjimmiltaan DNA-näyte hajotetaan ja digestoidaan restriktioentsyymeillä. Tuloksena olevat fragmentit erotetaan niiden pituuden mukaan ja fragmenttikoon kuvio eroaa kustakin testatuista yksilöistä.

Täysi RFLP-prosessi vaatii koetinmerkinnän, DNA-fragmentaation, elektroforeesin, blottauksen, hybridisaation, pesun ja autoradiografian. Havaittu RFLP visualisoidaan röntgenfilmin avulla autoradiografiassa, jossa DNA-fragmentteja voidaan tarkastella ja analysoida sen jälkeen, kun ne erotetaan toisistaan ​​elektroforeesilla.

Jotkin RFLP-analyysin sovelluksista ovat:

DNA-sormenjälki

• Oikeusterveyden asiantuntijat voivat käyttää RFLP-analyysiä tunnistamaan epäillyt, jotka perustuvat rikosten kohtaamien näytteiden näytteisiin. Isyys. RFLP: tä käytetään myös isyyden määrittämisessä tai jälkeläisten jäljittämisessä.
• Geneettinen monimuotoisuus. Tätä tekniikkaa voidaan käyttää luonnonvaraisten eläinten evoluution ja muuttoliikkeen tutkimiseen, eläinten populaatioiden jalostuskuvioiden tutkimiseen sekä tiettyjen sairauksien havaitsemiseen ja diagnosointiin.
• Geneemikartoituksen ja geneettisen taudin analyysin tärkeä työkalu on RFLP: n genomien vaihtelun havaitsemisen tekniikka.

Jos tietyn sairausgeenin sijaintia etsitään tietyssä kromosomissa, tutkijat analysoivat perheen jäsenten DNA: n sairauden kanssa ja etsivät sitten samanlaisia ​​perintötekijöitä RFLP-alleeleissa. Kun taudigeeni on lokalisoitu, RFLP-analyysi johtaen muihin perheenjäseniin voisi paljastaa mutantti-geenien kantajan tai signaalin yleisen sairauden riskin.

On tärkeää huomata, että RFLP-tekniikkaa ei ole käytetty laajalti nyt, kun DNA-analyysissä käytetään uudempia ja vankempia tekniikoita rikosteknisessä tieteessä ja monilla muilla aloilla.

Analyysin negatiivinen näkökulma

Valitettavasti RFLP-analyysitekniikka on tylsiä ja hidasta. Sen lisäksi, että vaaditaan suurta määrää DNA-näytettä - näytteen olisi tavallisesti oltava noin neljännes, joka on suhteellisen suuri DNA-näytteille - prosessi, joka on peräisin koettimen merkinnöistä pesuun ja autoradiografiaan, voi kestää jopa koko kuukauden loppuun.

Human Genome -projektin tulokset ovat korvanneet melko paljon RFLP: n tarvetta. Hanke mahdollisti ihmisen soluissa, ihmisen genomissa havaitun DNA: n koko sekvenssin määrittämisen ja kaikkien geenien tunnistuksen ihmisen genomissa.